Kategori

Jawatan Popular

1 Produk
Inflasi atau membengkokkan pundi hempedu pada kanak-kanak
2 Lamblia
Diet untuk penyakit hati dan pankreas
3 Resipi
Jangkitan virus Hepatitis B
Utama // Jaundice

Bagaimana virus hepatitis C didiagnosis?


Apabila diagnosis makmal hepatitis C diperlukan, doktor semestinya mengambil kira faktor-faktor berikut yang penting:

  • kehadiran atau ketiadaan dalam darah penanda jangkitan dengan virus hepatitis C, serta jenis lain;
  • petunjuk aktiviti enzim hati;
  • hasil pemeriksaan klinikal pesakit;
  • data sejarah epidemiologi.

Metafeksi hepatitis C dengan tahap kebolehpercayaan yang tinggi membolehkan hanya rekod menyeluruh semua data (harus diperhatikan bahawa diagnosis hepatitis B juga dijalankan). Untuk diagnosis lengkap virus, satu siri ujian darah dilakukan:

  • jumlah darah yang lengkap;
  • ujian darah biokimia;
  • PCR untuk penentuan RNA virus (tindak balas rantai PCR - polimerase);
  • coagulogram (penentuan pembekuan darah).

Satu ultrasound abdomen juga dilakukan. Biopsi tebal hati boleh ditetapkan. Hanya dengan semua keputusan di tangan, doktor akan membuat diagnosis yang tepat. Ia juga akan menentukan tahap perkembangan proses virus di dalam badan, menilai keadaan hati dan sejauh mana kerusakannya. Doktor akan memilih rawatan yang selamat dan berkesan.

Diagnosis hepatitis C virus

Tugas doktor dalam menentukan kerentanan kepada hepatitis C virus sangat mudah jika dia mempunyai maklumat tentang penyakit yang ada sebelumnya pada manusia dan pemeriksaan yang dijalankan.

Untuk memeriksa fungsi hati, perlu diperiksa. Ujian darah akan membantu mengenal pasti disfungsi dalam karyanya. Dengan mengandaikan kehadiran hepatitis C, doktor menetapkan kajian khusus untuk mengesan antibodi yang dihasilkan untuk memerangi penyakit serius ini.

Dalam kajian darah, virus hepatitis C dalam darah disahkan secara langsung atau tidak langsung, berdasarkan RNA - maklumat keturunan virus (seperti yang ditentukan oleh PCR) atau apabila antibodi dikesan dalam darah. Jika kehadiran virus RNA di dalam darah disahkan oleh PCR, ini menunjukkan kursus akut penyakit ini.

Dengan kehadiran antibodi terhadap virus hepatitis C, terdapat dua pilihan - sama ada penyakit kronik penyakit atau jangkitan telah sembuh sebelumnya. Hakikatnya adalah bahawa walaupun selepas penawar lengkap, antibodi dikesan dalam darah manusia untuk masa yang lama.

Iaitu, diagnostik makmal melibatkan ujian untuk menentukan kehadiran antibodi kepada virus hepatitis C (jika diagnosis hepatitis B dilakukan, maka antibodi untuk jenis virus ini dikesan). Sekiranya hasilnya positif, kajian langsung ditugaskan untuk mencari virus dalam darah. Untuk ini, kaedah PCR digunakan - reaksi rantaian polimerase. Ujian PCR amat sensitif, ia digunakan tepat untuk mengesahkan kehadiran virus hepatitis C dalam darah seseorang.

Kerana fakta bahawa orang yang mempunyai hepatitis C kronik sangat mungkin untuk membangunkan kanser hati, mereka secara sistematik, secara berkala (dari enam bulan hingga setahun) mengambil ujian darah untuk menentukan kehadiran penanda tumor kanser hati atau alpha-fetoprotein. Ultrasound hati dilakukan pada selang masa yang sama.

Sekiranya keputusan ujian positif, iaitu, jika analisis PCR mengesahkan kehadiran virus dalam badan, biopsi hati boleh ditetapkan oleh doktor. Prosedur ini membolehkan anda melihat berapa banyak virus yang tersebar di hati, dan menentukan sejauh mana kerusakannya.

Apabila melakukan biopsi, satu bahagian tisu hati diambil. Untuk analisis, bahan dikumpulkan menggunakan jarum khas. Selanjutnya, sampel tisu yang dihasilkan tertakluk kepada penyelidikan, yang dijalankan di bawah mikroskop.

Prosedur lain ditetapkan untuk diagnosis, seperti CTG, ultrasound. Mereka digunakan untuk menahan kanser hati.

Ujian darah juga diambil untuk menentukan jenis virus hepatitis C atau genotipnya, yang melanda tubuh seseorang yang sakit. Sekiranya terdapat data mengenai genotip virus dan kawasan kerosakan hati, lebih mudah bagi doktor untuk memilih kaedah rawatan yang diperlukan.

Ujian hepatitis C

Ia perlu memeriksa dan lulus ujian darah untuk kehadiran hepatitis C, termasuk membuat kajian PCR, jika:

  • terdapat simptom-simptom dari mana-mana penyakit hati, seperti ujian darah yang lemah;
  • jarum tidak steril telah digunakan, walaupun ia berlaku bertahun-tahun yang lalu;
  • Pasangan seksual mempunyai penyakit seperti hepatitis C;
  • hemodialisis dilakukan;
  • Semasa rawatan, organ donor atau darah digunakan, yang diperoleh sebelum 1992 (selepas tahun itu, semua bahan penderma diuji untuk hepatitis C).

Ujian darah untuk hepatitis C adalah wajib bagi pekerja perubatan yang, oleh jenis pekerjaan mereka, bersentuhan dengan jarum suntikan, darah dan cairan badan lain pesakit. Harus diingat bahawa pada masa ini ada peluang untuk diperiksa di rumah. Untuk melakukan ini, gunakan ujian khas, yang dijual di farmasi. Apabila anda menerima keputusan positif, anda perlu segera berjumpa doktor dan dapatkan ujian yang akan menentukan kehadiran atau ketiadaan virus dalam badan.

Apabila membuat diagnosis hepatitis C, doktor akan menetapkan rawatan dan memberikan cadangan untuk mencegah penyebaran virus lebih lanjut.

Insider Perubatan

Edisi Rangkaian Perubatan

Diagnosis Hepatitis C

Ramai orang tidak tahu bahawa mereka mempunyai hepatitis C. Ujian kehadiran antibodi adalah satu-satunya cara untuk memeriksa sama ada seseorang mempunyai virus hepatitis C. Hasilnya boleh bercampur, kerana ujian positif tidak selalu bermakna bahawa seseorang mempunyai hepatitis C.

Diagnosis hepatitis C virus

Sampel darah diperlukan untuk ujian antibodi hepatitis C. Antibodi adalah protein yang dicipta oleh tubuh untuk melindungi daripada patogen dan penyakit. Antibodi mengesan bahan yang boleh memudaratkan kesihatan. Istilah perubatan untuk bahan-bahan berbahaya ini adalah antigen. Apabila antibodi mengiktiraf antigen, ia akan memusnahkan atau menghentikan pergerakan selanjutnya dalam badan. Antibodi spesifik untuk patogen atau penyakit tertentu, dan mereka kekal di dalam badan selepas seseorang dijangkiti. Ini bermakna antibodi akan melawan penyakit pada masa akan datang.

Pemeriksaan ujian terhadap kehadiran antibodi terhadap virus hepatitis C. Jika ada antibodi dalam tubuh, ini bermakna sekali seseorang telah dijangkiti virus. Walau bagaimanapun, ini tidak selalu bermakna bahawa dia masih mempunyai patogen ini. Doktor akan mengambil sampel darah yang akan dihantar untuk ujian. Keputusan mungkin mengambil masa beberapa hari atau minggu.

Keputusan ujian hepatitis C

Terdapat dua keputusan ujian untuk antibodi hepatitis C.

Hasilnya tidak reaktif atau negatif - ini bermakna seseorang tidak mempunyai virus. Pengecualian adalah jika seseorang baru-baru ini dijangkiti virus, sebagai contoh, melalui darah yang tercemar.
Hasil ujian reaktif atau positif bermakna bahawa orang itu mempunyai virus, tetapi ini tidak bermakna dia masih memilikinya. Ujian lanjut diperlukan untuk memeriksa sama ada virus itu aktif.

Rawatan Hepatitis C

Selepas membuat diagnosis hepatitis C, seseorang perlu menjalani satu siri ujian yang berbeza untuk melihat bagaimana virus itu telah menjejaskan badan. Ujian ini akan memeriksa kerosakan hati, menentukan sejauh mana fungsi hati berfungsi, dan membantu doktor menentukan rawatan.
Hepatitis C dirawat dengan ubat-ubatan antiviral yang bertujuan membersihkan tubuh daripada virus. Matlamat lain adalah untuk melambatkan kerosakan hati. Ini akan mengurangkan kemungkinan seseorang akan membina kanser hati atau parut hati yang teruk, yang dikenali sebagai sirosis. Seseorang yang mempunyai hepatitis C harus diuji secara teratur semasa rawatan untuk mengetahui seberapa berkesan ubat itu.

Virus Hepatitis C © www. public-domain-image.com

Kaedah makmal bagi diagnosis hepatitis C

Selepas seseorang telah menerima reaktif atau hasil positif untuk antibodi hepatitis C, dia mesti lulus dua ujian kawalan. Ujian pertama memeriksa jika orang itu mempunyai virus; Satu lagi mengukur jumlah virus dalam darah.

Diagnosis PCR hepatitis C

Kriteria pertama adalah ujian kualitatif untuk replikasi gen Cp, juga dikenali sebagai diagnostik PCR. Hasil positif bermakna seseorang mempunyai virus hepatitis C. Keputusan negatif menunjukkan bahawa tubuh memusnahkan virus tanpa rawatan.
Ujian kedua ialah ujian kuantitatif untuk replikasi RNA. Ujian membandingkan jumlah virus dalam badan sebelum, semasa dan selepas rawatan. Lebih kecil jumlah virus dalam darah, semakin tinggi kemungkinan seseorang dapat menghapuskan virus dari tubuhnya.
Selepas diagnosis hepatitis C, ujian lain mungkin diperlukan:
Ujian untuk hepatitis A dan B. Sekiranya seseorang tidak pernah terdedah kepada bentuk virus ini, dia harus diberi vaksin.

Ujian untuk mengenal pasti strain hepatitis C. Ada tiga strain biasa, dan rawatan masing-masing agak berbeza.

Ujian fungsi hati yang menguji keradangan atau merosakkan hati.

Faktor risiko jangkitan hepatitis C

  • HIV;
  • jarum untuk suntikan dadah;
  • mempunyai pasangan seksual dengan hepatitis C kronik;
  • pemindahan organ atau derma darah sehingga tahun 1992;
  • bekerja dalam penjagaan kesihatan;
  • Hemodialisis adalah proses yang menapis darah.

Orang yang dilahirkan antara tahun 1945 dan 1965 adalah lima kali lebih cenderung mengalami virus. Tidak jelas mengapa mereka mempunyai jangkitan jangkitan hepatitis C yang lebih tinggi berbanding dengan penduduk lain. Penyelidik percaya bahawa ini mungkin berkaitan dengan standard amalan perubatan pada masa lalu, sebelum pengenalan kawalan jangkitan.

Virus Hepatitis C boleh menyebabkan kemudaratan besar kepada badan. Terdahulu virus itu dikesan, semakin tinggi kemungkinan rawatannya. Orang yang terdedah kepada faktor risiko atau berisiko tinggi harus diuji.

Diagnosis makmal hepatitis C virus, B, A

Hepatitis virus adalah penyakit inflamasi pada hati, patologi yang paling biasa di dunia di kalangan lesi hepatik lain. Bergantung kepada jenis hepatitis virus, diagnosis penyakit itu berdasarkan gejala klinikal dan ujian makmal. Satu peranan yang penting dimainkan oleh sejarah penyakit yang telah dijelaskan dengan teliti dan sejarah epidemiologi. Terdapat beberapa bentuk hepatitis virus, dengan mengambil kira jenis patogen, manifestasi klinikal, kursus dan keterukan penyakit. Diagnosis makmal hepatitis virus dalam banyak kes adalah satu-satunya kaedah untuk menentukan penyakit dengan tepat. Kini dikenal pasti dan dikaji beberapa jenis virus dengan kesan hepatotropik (A, B, C, D, E), yang menyebabkan gambar klinikal yang sama. Oleh kerana kekurangan gejala dan kesukaran untuk mendiagnosis hepatitis C, ia dianggap paling sukar bagi semua spesies yang diketahui.

Hepatitis A virus

Ia mempunyai transmisi tahi - lisan, yang menjadikannya jangkitan yang meluas. Metafeksi hepatitis A tidak sukar. Tempoh inkubasi agak pendek - dari 7 hingga 50 hari; dicirikan oleh permulaan yang teruk: demam tinggi, tanda sindrom asthenik, kesakitan pada semua sendi - secara klinikal menyerupai selesema. Tempoh penyakit - 1 bulan. Penyakit ringan kadang-kadang tidak memerlukan langkah terapi khusus, terdapat kes-kes penyembuhan diri.

Hepatitis B virus

Untuk kursus subklinikal, diagnosis makmal hepatitis B adalah satu-satunya kaedah yang tepat untuk mengesahkan diagnosis - antigen dan antibodi virus kepada protein patogen dan DNA HBV ditentukan dalam darah. Cara penghantaran:

  • parenteral - melalui darah;
  • seks - melalui sperma;
  • menegak: dari ibu kepada janin (virus tidak disebarkan kepada bayi melalui susu ibu).

Jangkitan ini memasuki tubuh melalui penggunaan jarum suntikan (penggunaan jarum tunggal oleh penagih dadah), melalui instrumen (semasa pembedahan, tatu, akupunktur, menindik telinga, manicure, pedikur), dan pemindahan darah. Masa laten adalah dari 2 bulan hingga enam bulan. Gejala menyerupai permulaan hepatitis A virus: sindrom seperti selesema berkembang, terdapat sakit di seluruh badan dan di sendi, kelemahan parah, kelesuan. Kadangkala ruam berlaku. Prognosis untuk hepatitis akut agak baik: pemulihan berlaku dalam 80% kes. Bentuk subklinis penyakit ini sering menjadi kronik, jarang sekali dapat mencapai penyembuhan lengkap dalam kes tersebut.

Pada masa yang sama, dalam banyak kes penyakit, satelit hepatitis B dikesan - virus D (delta), yang menyebabkan hepatitis D virus dan memburukkan lagi penyakit yang mendasari.

Hepatitis E virus adalah serupa dengan gejala klinikal kepada HAV, tetapi mempunyai permulaan yang beransur-ansur dan lebih berbahaya bagi wanita hamil.

Manifestasi HCV

Diagnosis makmal hepatitis C (HCV) di makmal sangat penting, kerana kira-kira 3% penduduk dunia dijangkiti dengannya. Setiap tahun, peningkatan kejadian - ini dikaitkan dengan peningkatan ketagihan dadah di dunia.

Perhatian! Hepatitis C virus adalah antara yang paling berbahaya dan teruk di kalangan bentuk-bentuk luka berjangkit yang diketahui di dalam hati. Ia dipanggil "pembunuh lembut" kerana kursus subklinikal untuk masa yang lama, dan kemudian keputusan cepat kepada sirosis dengan kemungkinan hasil maut. Gabungan HCV dengan lain-lain bentuk hepatitis berjangkit secara signifikan memburukkan lagi penyakit dan mempercepatkan kematian.

HCV akut adalah asimtomatik dan oleh itu jarang didiagnosis. Jika ada kemungkinan untuk mengenal pasti penyakit dalam fasa ini, maka dengan permulaan rawatan yang tepat pada masanya dalam 20%, pemulihan mungkin berlaku.

HCV selalunya diperhatikan dalam bentuk kronik, dalam peringkat lewat. Proses pengkatanan berlaku dalam 50% kes.

Dengan asimtomatik pengangkutan virus C, sel-sel hati secara beransur-ansur rosak, fibrosis berkembang. Selanjutnya, jika rawatan tepat pada masanya tidak dilakukan, risiko sirosis atau kanser hati meningkat.

Diagnosis hepatitis virus dalam sebarang bentuk adalah berdasarkan definisi:

  • patogen dan replikasinya;
  • penanda jangkitan.

Kaedah diagnostik termasuk tindak balas biologi imunokimia dan molekul, yang mendedahkan:

  • antigen patogen;
  • antibodi kepada virus;
  • asid nukleik.

Struktur virus C

Virus C (BC) mempunyai RNA tunggal terkandas dalam genomnya. Beliau adalah satu-satunya di antara agen penyebab hepatitis virus, yang mempunyai struktur seperti itu. Kedua-dua pembawa dan pesakit tidak dapat meneka tentang virus yang mereka ada. Oleh itu, untuk mengenal pasti patologi dengan diagnosis yang tidak jelas, perlu dilakukan beberapa kajian dan ujian diagnostik.

Genom virus C (RNA) terdiri daripada 10 ribu asas nukleotida. Kepelbagaian tinggi seperti ini menentukan ciri-ciri HCV. Dalam kajian nukleotida RNA mendedahkan perbezaan ketara dalam struktur mereka. Mengambil kira ciri-ciri struktur yang dikesan, klasifikasi HCV telah diwujudkan, mengikut mana yang dibezakan berikut:

  • pilihan (terdapat 6 - 9);
  • subtipe;
  • genotip.

Ada di antara mereka yang terdapat di semua negara di dunia, tanpa pengecualian, beberapa di kawasan tertentu. Apabila virus C memasuki badan, ia dimasukkan ke dalam rantaian nukleotida molekul RNA. Ia sentiasa bermutasi (diubah suai), dan seseorang itu boleh menjadi pembawa 50 subtipe satu genotip virus tunggal. Sistem kekebalan tubuh tidak mengikuti mutasi yang pesat: antibodi dikeluarkan untuk satu kumpulan virus, penyakit ini menjadi kronik.

Definisi virus C

Diagnosis HCV telah menjadi realiti dengan munculnya biologi molekul. Ini dijelaskan oleh kandungan virus yang sangat rendah dalam darah, yang tidak membenarkan pengasingan antigennya dengan kaedah yang sedia ada sebelumnya.

Sekiranya HCV disyaki, diagnosis makmal bertujuan untuk menentukan:

  • antibodi (Ig G, Ig M) oleh ELISA (ujian imunosorben enzim yang berkaitan enzim);
  • Virus RNA menggunakan PCR (reaksi rantai polimerase).

Perhatian! Penanda serologi hepatitis C adalah RNA - HCV dan antibodi yang terbentuk di dalam badan.

PCR - definisi virus hepatitis C

RNA - HCV tergolong dalam penanda awal HCV: penampilannya dalam darah berlaku 10 hingga 12 hari selepas jangkitan, iaitu lebih awal daripada peningkatan aminotransferases (AST, ALT, GGT). Pengesanan RNA - HCV menunjukkan replikasi aktif (pembiakan) virus. Ini adalah "standard emas" diagnosis, kerana ia menjelaskan dan mengesahkan diagnosis walaupun dalam tempoh ketika gejala penyakit praktikal tidak hadir. PCR perlu dijalankan untuk memantau keputusan ELISA. Ia dilakukan dalam versi kualitatif dan kuantitatif.

Beban virus dianggap tinggi dengan PCR> 800 ribu IU / ml atau 2 juta salinan / ml; rendah - dengan PCR

Perhatian! PCR bukan sahaja analisis kualitatif (pengesanan virus RNA), tetapi juga menentukan jumlah salinan RNA dalam 1 ml darah. Ia memainkan peranan penting dalam menetapkan rawatan yang berkesan dan menilai kejayaan dalam terapi. Sekiranya RNA virus C dikesan dalam plasma darah, ini menunjukkan fasa akut penyakit. Tahap kerosakan hati dan penyebaran perubahan patologi - fibrosis dan keradangan - ditemui selepas biopsi. Kaedah ini adalah yang paling bermaklumat dan boleh dipercayai dalam diagnosis. Manipulasi benar-benar tidak berbahaya kepada pesakit dan berlangsung beberapa saat.

ELISA - penentuan antibodi kepada virus

Sistem imun manusia, apabila ditelan oleh mana-mana agen berjangkit, menghasilkan antibodi (Ig G, Ig M) kepada patogen. Imunoglobulin yang dihasilkan mewujudkan kompleks yang kuat dengan protein asing (dengan antigen virus), parameter kuantitatif dan kualitatif yang ditentukan semasa ELISA. Ia merujuk kepada kaedah pemeriksaan tidak langsung: semasa ujian, ia bukanlah virus yang dikesan, tetapi tindak balas imun organisma terhadap agen penyerang yang menyerang berlaku. ELISA dijalankan untuk diagnosis awal, pemerhatian proses dari masa ke masa.

Antibodi dikesan pada 80% daripada mereka yang dijangkiti hanya 5-6 minggu selepas permulaan penyakit ini, dalam 90% hingga 12 minggu. Kadang kala analisis ini memberikan tanggapan positif palsu. Bagi kes sedemikian, terdapat ujian khas - spektrum protein antibodi ditentukan oleh imunoblotting rekombinan.

Untuk mencapai hasil yang boleh dipercayai, pemeriksaan dengan PCR dan ELISA dilakukan dua kali dengan tempoh tertentu. Sebagai peraturan, tempoh masa adalah 6 bulan.

Taktik pemerhatian

Untuk memperjelaskan aktiviti proses di hati, untuk menentukan taktik rawatan, ujian hati ditentukan:

  • transaminase darah (ALT, AST, GGT);
  • jumlah bilirubin dan pecahannya;
  • alkali fosfatase (alkali fosfatase);
  • jumlah protein dengan pecahan.

Bergantung pada hasil penyelidikan makmal, taktik yang berlainan dari pengurusan pesakit digunakan:

  • Dengan nombor biasa, pesakit berada di bawah pengawasan seorang doktor. Dengan perubahan kesejahteraan, analisis diulangi.
  • Dengan peningkatan sebanyak 2 atau lebih kali, ELISA untuk anti-HCV dilakukan.
  • Jika enzyme immunoassay adalah positif, PCR digunakan - tindak balas rantai polimerase, hasilnya digunakan untuk memilih terapi antiviral.
  • Dengan ujian fungsi hati 2 kali ganda atau lebih tinggi, tetapi ELISA negatif, atau peningkatan 2 kali ganda dalam sampel hati, ELISA positif dan PCR negatif, pemantauan dinamik terus dengan pemeriksaan dan kawalan ujian darah biokimia 1 kali dalam 3 bulan.
  • Dengan indeks biokimia yang tinggi, keputusan positif ELISA dan PCR, diagnostik klinikal dilakukan, ubat antiviral dipilih, dan rawatan dipantau.

Kajian parameter biokimia

Menurut hasil analisis biokimia darah, tahap aminotransferases dinilai.

  • ALT - alanine aminotransferase - adalah sebahagian daripada hepatosit. Bahkan sedikit kelebihan norma menunjukkan kehadiran hepatitis (termasuk virus) pada peringkat awal.
  • AST - aspartate aminotransferase: jika parasnya melebihi ALT, ia adalah penunjuk fibrosis awal (proliferasi tisu penghubung).

Tinggi ALT, AST dalam darah adalah akibat daripada nekrosis sel hati. Mereka adalah penunjuk tidak langsung aktiviti proses keradangan. Sekiranya tahap ALT melebihi norma sebanyak 3 kali, kita bercakap mengenai aktiviti minimum, 3 hingga 10 kali - aktiviti sederhana proses keradangan, lebih daripada 10 kali - hepatitis dengan aktiviti yang tinggi.

Tahap AST juga berubah dalam patologi lain, ALT dianggap lebih spesifik untuk penyakit hati.

  • Peningkatan tahap bilirubin total dan langsung berlaku dengan pembentukan meningkat atau penyingkiran lambat dari badan. Hepatitis virus berlaku kerana melanggar bilirubin. Membran mukus dan sklera Iterik dipantau pada peringkat bilirubin di atas 30 - 35 mmol / l, dengan pengumpulan selanjutnya kulit menjadi kuning. Dalam kursus kronik ini tidak berlaku.
  • Peningkatan fosfatase alkali (alkali phosphatase), gammaglutamintransferase (GGT), kolesterol dan asid hempedu adalah ciri sindrom. Tetapi penyakit hati bukanlah satu-satunya sebab peningkatan mereka.
  • Penambahan albumin dikaitkan dengan fungsi hati sintetik terjejas.

Diagnosis klinikal

Manifestasi klinikal memihak kepada hepatitis C. virus Kursus kronik dicirikan oleh gejala sederhana: kebimbangan dan peningkatan keletihan menjelang akhir hari, penurunan toleransi terhadap usaha fizikal yang biasa, bimbang. Dalam analisis biokimia biasa, manifestasi klinikal seperti ini jarang dikaitkan dengan hepatitis virus. Gambar klinikal yang maju muncul pada peringkat akhir: telangiectasias dan "bintang" hepatic muncul, hepato - dan splenomegaly, jaundis sclera, kulit dan membran mukosa mulut, gatal kulit (dengan bilirubin dalam darah yang sangat tinggi), urin gelap, najis berwarna, pendarahan, kehilangan berat badan, palma hati.

Perhatian! Sekiranya terdapat HCV kronik, ia berkemungkinan tinggi untuk membangunkan kanser hati, jadi perlu menguji darah untuk penanda tumor dan alpha-fetoprotein pada selang masa yang tetap (1 kali dalam setengah tahun).

Ultrasound

Di samping kaedah makmal, terdapat kaedah pemeriksaan tambahan yang memainkan peranan penting dalam diagnosis HCV. Ini termasuk OBP ultrasound. Dengan kaedah pemeriksaan ini, keadaan organ-organ rongga perut diperiksa. Saiz, ketumpatan, struktur, susunan organ ditentukan, lesi volum, calculi, pelanggaran aliran keluar hempedu, saiz portal dan pembuluh darah splenik. Splenomegaly, hepatomegali, pengembangan vena portal menunjukkan hepatitis dengan peralihan kepada sirosis. Pemeriksaan lanjut, serodiagnosis diperlukan untuk mengecualikan atau mengesahkan hepatitis C. virus

Fibroscan dan ujian lain

Kaedah diagnosis tidak langsung, sama dengan biopsi - fibroscanning (elastometry): tidak invasif, selamat, boleh dijalankan berulang kali untuk memantau terapi. Tanda-tanda untuk elastometri disyaki proses patologi dalam hati, termasuk kehadiran virus.

Terdapat juga banyak ujian diagnostik yang merupakan alternatif kepada biopsi hati. Ujian menyediakan peluang untuk menentukan gambaran morfologi sebenar organ yang terjejas, fibrosis sedia ada, steatosis, nekrosis atau keradangan. Sebahagian daripada mereka adalah:

  • FibroTest - dengan bantuannya, analisis komprehensif terhadap 5 parameter biokimia dan tahap diagnosis tahap fibrosis yang tepat pada masanya.
  • AktiTest - mengenal pasti 6 parameter biokimia dan memungkinkan untuk mendiagnosis proses nekroso-radang di hati.

Perhatian! Prognosis HCV bergantung pada diagnosis tepat pada masanya, pada tahap jangkitan, dan keinginan pesakit untuk pulih. Kaedah terapeutik moden dengan penggunaan ubat-ubatan antiviral memungkinkan untuk menyembuhkan penyakit atau mencapai pengampunan jangka panjang, memanjangkan hayat dan meningkatkan kualitinya pada orang yang dijangkiti atau pembawa. Hepatitis C virus, walaupun diagnosis yang sukar dan rawatan jangka panjang, bukanlah satu hukuman. Ia perlu untuk berjumpa dengan doktor pada masa yang tepat untuk menerima penjagaan perubatan yang berkualiti tinggi dan dengan teliti menjalankan semua pelantikannya.

Hepatitis C virus

Hepatitis C adalah penyakit berjangkit virus hati yang ditransmisikan melalui pemindahan, dicirikan oleh kursus ringan, seringkali subklinikal, jarang sederhana dalam fasa jangkitan utama dan kecenderungan untuk kronik, sirosis dan keganasan. Dalam kebanyakan kes, hepatitis C mempunyai permulaan anicteric, oligosymptomatic. Dalam hal ini, ia mungkin tidak didiagnosis selama beberapa tahun dan dikesan apabila sirosis sudah berkembang di dalam tisu hati atau transformasi malignan berlaku kepada karsinoma hepatoselular. Diagnosis hepatitis C dianggap cukup munasabah apabila RNA virus dan antibodinya dikesan dalam darah akibat kajian berulang menggunakan PCR dan pelbagai jenis tindak balas serologi.

Hepatitis C virus

Hepatitis C adalah penyakit berjangkit virus hati yang ditransmisikan melalui pemindahan, dicirikan oleh kursus ringan, seringkali subklinikal, jarang sederhana dalam fasa jangkitan utama dan kecenderungan untuk kronik, sirosis dan keganasan. Hepatitis C virus disebabkan oleh virus yang mengandungi RNA daripada keluarga Flaviviridae. Kecenderungan jangkitan ini kepada kronik disebabkan oleh keupayaan patogen untuk kekal dalam badan untuk masa yang lama, tanpa menyebabkan manifestasi sengit jangkitan. Seperti flaviviruses lain, virus hepatitis C mampu mengalikan untuk membentuk quasi-tams dengan pelbagai variasi serologi, yang menghalang tubuh daripada membentuk tindak balas imun yang mencukupi dan tidak membenarkan pembangunan vaksin yang berkesan.

Virus hepatitis C tidak berkembang biak dalam budaya sel, yang menjadikannya mustahil untuk mengkaji secara terperinci rintangannya dalam persekitaran luaran, tetapi diketahui bahawa ia adalah lebih tahan terhadap HIV, mati apabila terdedah kepada sinar ultraviolet dan tahan pemanasan hingga 50 ° C. Reservoir dan sumber jangkitan adalah orang yang sakit. Virus ini dijumpai dalam plasma darah pesakit. Menular sebagai penghidap hepatitis C akut atau kronik, dan orang yang mengalami jangkitan tanpa gejala.

Mekanisme penularan virus hepatitis C adalah parenteral, terutama yang ditularkan melalui darah, tetapi kadang-kadang jangkitan boleh terjadi apabila ia berhubungan dengan cairan biologi yang lain: air liur, air kencing, dan air mani. Prasyarat untuk jangkitan adalah pencetusan langsung virus yang mencukupi dalam darah seseorang yang sihat.

Dalam majoriti kes, jangkitan sekarang berlaku apabila ubat intravena digunakan bersama. Penyebaran jangkitan di kalangan penagih dadah mencapai 70-90%. Pengguna ubat adalah sumber wabak yang paling berbahaya bagi virus hepatitis C. Di samping itu, risiko peningkatan jangkitan pada pesakit yang menerima rawatan perubatan dalam bentuk pemindahan darah berganda, campur tangan pembedahan, suntikan parenteral dan punctures menggunakan instrumen yang tidak boleh digunakan semula steril. Pemindahan boleh dilakukan semasa tatu, menindik, memotong semasa manicure dan pedikur, manipulasi dalam pergigian.

Dalam 40-50% kes, tidak mungkin untuk mengesan cara jangkitan. Dalam kumpulan profesional perubatan, kejadian hepatitis C tidak melebihi yang di kalangan penduduk. Transmisi dari ibu ke kanak-kanak berlaku apabila kepekatan tinggi virus berkumpul di dalam darah ibu, atau apabila virus hepatitis C digabungkan dengan virus imunisasi manusia.

Kemungkinan membina hepatitis C dengan satu punca kecil patogen ke dalam aliran darah seseorang yang sihat adalah kecil. Penyebaran jangkitan seksual jarang direalisasikan, terutama pada individu yang mempunyai jangkitan HIV bersamaan, rentan terhadap perubahan pasangan seksual yang kerap. Kerentanan semulajadi seseorang kepada virus hepatitis C sebahagian besarnya bergantung kepada dos patogen yang diterima. Imuniti pasca menular tidak difahami dengan baik.

Gejala hepatitis C virus

Tempoh inkubasi hepatitis C virus bervariasi dari 2 hingga 23 minggu, kadang-kadang melambatkan sehingga 26 minggu (yang disebabkan oleh satu atau lain laluan penghantaran). Dalam majoriti kes (95%), fasa akut jangkitan tidak ditunjukkan oleh gejala yang teruk, meneruskan versi subklinik anikterik. Kemudian, diagnosis serologi hepatitis C mungkin dikaitkan dengan kebarangkalian "tingkap imunologi" - satu tempoh ketika, walaupun terdapat jangkitan, tidak ada antibodi terhadap patogen, atau titer mereka tidak terlalu kecil. Dalam 61% kes, hepatitis virus didiagnosis makmal 6 atau lebih bulan selepas gejala klinikal yang pertama.

Secara klinikal, manifestasi hepatitis C virus dapat nyata dalam bentuk gejala umum: kelemahan, sikap tidak peduli, selera makan menurun, tepu pesat. Tanda-tanda setempat boleh diperhatikan: keterukan dan ketidakselesaan di hipokondrium yang betul, dispepsia. Demam dan mabuk dalam hepatitis C virus adalah gejala yang jarang berlaku. Suhu badan, jika ia naik, kemudian ke nilai subfebril. Keamatan manifestasi gejala tertentu sering bergantung kepada kepekatan virus dalam darah, keadaan imuniti umum. Gejala biasanya kecil dan pesakit tidak cenderung untuk melampirkan kepentingannya.

Dalam analisis darah dalam tempoh akut hepatitis C, kandungan leukosit dan platelet yang rendah sering dicatat. Dalam satu perempat kes, terdapat jaundis sederhana jangka pendek (selalunya terhad oleh sklerera icteric dan manifestasi biokimia). Di masa depan, dengan jangkitan kronik, episod jaundis dan peningkatan dalam aktiviti pemindahan hepatik mengiringi keterukan penyakit.

Hepatitis C virus yang teruk dinyatakan dalam tidak lebih daripada 1% kes. Pada masa yang sama, gangguan autoimun boleh berkembang: agranulocytosis, anemia aplastik, dan neuritis saraf periferal. Dengan kursus sedemikian mungkin membawa maut dalam tempoh pranatal. Dalam kes biasa, hepatitis C virus berjalan dengan perlahan, tanpa gejala yang teruk, baki tidak didiagnosis selama bertahun-tahun dan menunjukkan dirinya sendiri walaupun dengan kemusnahan besar tisu hati. Selalunya, buat kali pertama, pesakit didiagnosis dengan hepatitis C, apabila tanda-tanda sirosis atau kanser hati hepatoselular sudah berlaku.

Komplikasi hepatitis C virus adalah sirosis dan kanser hati primer (karsinoma hepatoselular).

Diagnosis hepatitis C virus

Tidak seperti hepatitis B virus, di mana ia boleh mengasingkan antigen virus, diagnosis klinikal hepatitis C virus dilakukan menggunakan kaedah serologi (IgM antibodi kepada virus ditentukan menggunakan ELISA dan RIBA), serta penentuan RNA virus dalam darah menggunakan PCR. Dalam kes ini, PCR dilakukan dua kali, kerana terdapat kemungkinan reaksi positif palsu.

Jika antibodi dan RNA dikesan, boleh dikatakan bahawa diagnosis itu cukup dipercayai. Takrif IgG dalam darah boleh bermakna kedua-dua kehadiran virus di dalam badan, dan jangkitan yang dipindahkan sebelum ini. Pesakit dengan hepatitis C ditetapkan ujian hati biokimia, coagulogram, ultrasound hati, dan dalam beberapa kes diagnostik yang sukar, biopsi hati.

Rawatan hepatitis C virus

Taktik terapeutik untuk hepatitis adalah sama seperti hepatitis B virus: diet No. 5 ditetapkan (sekatan lemak, terutama refraktori, dengan nisbah protein dan karbohidrat biasa), pengecualian produk yang merangsang rembesan enzim hempedu dan hepatik (asid, goreng, makanan dalam tin ), tepu zat aktif bahan lipolitik (serat, pektin), sejumlah besar cecair. Alkohol sepenuhnya dikecualikan.

Terapi khusus untuk hepatitis virus adalah pentadbiran interferon dalam kombinasi dengan ribavirin. Tempoh kursus terapeutik adalah 25 hari (dengan varian virus yang tahan terhadap terapi antiviral, kursus mungkin memanjang sehingga 48 hari). Sebagai pencegahan kolestasis, persediaan asid ursodeoxycholic dimasukkan dalam kompleks langkah-langkah terapeutik, dan sebagai antidepresan (sejak keadaan psikologi pesakit sering mempengaruhi keberkesanan rawatan), ademetionin. Kesan terapi antiviral secara langsung bergantung kepada kualiti interferon (tahap penyucian), intensiti terapi dan keadaan umum pesakit.

Menurut petunjuk, terapi asas boleh ditambah dengan detoksifikasi oral, antispasmodik, enzim (mezim), antihistamin dan vitamin. Dalam kes teruk hepatitis C, detoksifikasi intravena dengan larutan elektrolit, glukosa, dextran ditunjukkan, dan jika perlu, terapi ditambah dengan prednison. Jika komplikasi berkembang, kursus rawatan dilengkapi dengan langkah-langkah yang sesuai (rawatan sirosis dan kanser hati). Sekiranya perlu, melahirkan plasmapheresis.

Prognosis untuk hepatitis C virus

Dengan rawatan yang tepat, pemulihan berakhir 15-25% daripada kes. Selalunya, hepatitis C menjadi kronik, menyumbang kepada perkembangan komplikasi. Kematian dalam hepatitis C biasanya disebabkan oleh sirosis atau kanser hati, dan kadar kematian adalah 1-5%. Prognosis jangkitan bersama virus hepatitis B dan C kurang baik.

Pencegahan hepatitis C virus

Langkah-langkah am untuk pencegahan hepatitis C termasuk pemeliharaan yang berhati-hati terhadap rejim kebersihan di institusi perubatan, mengawal kualiti dan kemandulan darah transfusi, serta pemeriksaan kebersihan institusi yang menyediakan perkhidmatan kepada penduduk menggunakan kaedah traumatik (tatu, menindik).

Antara lain, penjelasan, aktiviti pendidikan dijalankan di kalangan golongan muda, pencegahan individu diiklankan: seks selamat dan penolakan dadah, pelaksanaan prosedur traumatik perubatan dan lain-lain di institusi yang disahkan. Suntikan pakai buang diedarkan di kalangan penagih dadah.

Diagnosis makmal hepatitis C

MI Mikhailov, Institut Epidemiologi dan Mikrobiologi. N.F. Gamalei RAMS, Moscow

Apabila membuat diagnosis "hepatitis C", faktor-faktor berikut yang paling penting perlu dipertimbangkan:

  • penunjuk aktiviti enzim "hati";
  • kehadiran atau ketiadaan penanda jangkitan dengan virus hepatitis C (HCV) dan virus hepatotropik lain;
  • data sejarah epidemiologi;
  • hasil pemeriksaan klinikal pesakit. Hanya perakaunan komprehensif bagi faktor-faktor ini membolehkan untuk mendiagnosis penyakit ini dengan tahap kebolehpercayaan yang tinggi. Pekerja makmal mesti memberikan maklumat objektif mengenai spektrum antigen dan antibodi virus yang dikenal pasti, serta RNA HCV, membolehkan klinisi, pekerja khidmat transfusi darah dan ahli epidemiologi menyelesaikan masalah mereka. Selalunya ia adalah:
  • pengenalpastian orang dengan HCV untuk mengurangkan tahap hepatitis C selepas transfusi;
  • diagnosis dan perbezaan antara hepatitis C akut dan kronik;
  • prognosis penyakit;
  • pelantikan, penilaian dan prognosis keberkesanan terapi;
  • kajian mengenai penyebaran HCV dalam populasi dan pelbagai kumpulan populasi.
    Dalam kes ini, bidang kerja utama yang dilakukan oleh kakitangan makmal adalah:
  • pembangunan dan pemilihan kaedah yang paling bermaklumat untuk mengenal pasti penanda jangkitan HCV;
  • penentuan kriteria untuk penilaian objektif hasil yang diperoleh;
  • pembangunan algoritma penyelidikan makmal yang optimum;
  • pelaksanaan sistem untuk meningkatkan kualiti pengesanan penanda jangkitan HCV.

    Asas diagnosis makmal hepatitis C adalah pengetahuan tentang HCV, replikasi, maklumat mengenai dinamika kemunculan dan penghilangan penanda jangkitan, serta kaedah imunokimia dan molekul-biologi moden untuk pengesanan antigen, antibodi dan asid nukleik.

    Virus hepatitis C. HCV pertama kali dikenalpasti pada tahun 1988, apabila sekumpulan penyelidik yang diketuai oleh M. Houghton dan Choo Q.L menggunakan kaedah penyelidikan molekul-biologi baru, mengkloning dan menjejaskan genom virus [I]. Satu zarah virus hepatitis C mempunyai bentuk sfera dengan garis pusat purata kira-kira 50 nm [2,3]. Percubaan untuk mengesan dan mengkaji struktur virus hepatitis C telah dibuat semenjak penemuan virus itu, namun masih terdapat hasil yang tidak didokumentasikan dengan baik dari kajian ini, yang mungkin disebabkan oleh kesulitan mengumpul zarah virus dalam jumlah yang diperlukan.

    VG Satu-satunya ahli genus Hepacivirus dalam keluarga Flaviviridae, termasuk virus seperti virus cirit buncit dan demam babi (genus Pestivirus) dan virus demam kuning, virus denggi dan GB: GBV-A, GBV-B dan GBV-C / HGV (genus Flavivi-rus). Struktur virus hepatitis C boleh diwakili seperti berikut (Skema No. 1). Nukleocapsid mengandungi RNA virus hepatitis C. Dari atas, nukleocapsid disalut dengan membran lipid dengan menyelubungi di dalamnya menyelubungi protein yang dikodkan oleh RNA HCV. Genom virus diwakili oleh molekul RNA linier tunggal yang mempunyai polaritas positif, dengan panjang kira-kira 9.600 nukleotida. Organisasi genom HCV serupa dengan flaviviruses lain. Ia membezakan dua zon yang menodai protein struktur dan bukan struktur (berfungsi). Gen pengekodan protein struktur terletak di 5 'rantau genom virus, dan bukan struktur di 3 rantau'. Gen HCV mempunyai satu bacaan bacaan terbuka (ORS), satu polipeptida tunggal (kira-kira 3000 asid amino), yang dipotong menjadi protein struktur dan bukan struktur oleh protease sel dan selular.

    Rajah. 1. Unsur struktur HCV

    Struktur protein termasuk protein yang dikodkan oleh RNA HCV, Core, El, dan E2. Tiga bentuk protein HCV C dikesan: penuh (p21) dengan berat molekul 21 kD, dipotong (p19) dan bentuk (p16) yang terdapat dalam nucleoli hepatosit yang dijangkiti. Di permukaannya, C-protein membawa pelbagai epitope B-sel yang sangat konservasi, yang kewujudannya sangat penting untuk mengesan antibodi kepada HCV dalam proses diagnosis makmal hepatitis C.

    Zon RNA HCV E1 dan E2 menyandikan protein dengan berat molekul 31 dan 70 kD. Protein ini mempunyai beberapa tapak N-glikosilasi; dalam protein E1, sehingga 6 tapak tersebut ditakrifkan, dan dalam E2 - 11. Dalam bahagian E2 terdapat maklumat mengenai protein kecil - p7, yang tidak terdapat dalam struktur virus.

    Penentuan kawasan yang terletak lebih dekat dengan RNA HCV 3'-end - sebagai zon yang membawa maklumat mengenai protein bukan struktur virus, menunjukkan bahawa protein ini bukan komponen struktur zarah virus. Dalam zon bukan struktur RNA HCV, terdapat bahagian yang ditetapkan sebagai: NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A dan NS5B. Kebanyakan protein yang dikodkan oleh zon bukan struktur RNA HCV diperlukan untuk replikasi virus.

    Satu analisis perbandingan urutan nukleotida RNA isolat HCV yang diperolehi di rantau yang berlainan di dunia dan walaupun dalam perjalanan penyakit dari pesakit yang sama mendedahkan ciri utama virus ini - heterogenitas tinggi RNA. Kedudukan variasi genetik yang signifikan dari RNA HCV membentuk asas teori yang menerangkan: pengangkutan jangka panjang (kadang-kadang seumur hidup) virus, perkembangan penyakit kronik yang kerap, kesulitan dalam terapi dan penciptaan vaksin yang efektif. Perbezaan yang paling ketara dalam urutan RNA HCV tertumpu di bahagian terminal N2 di rantau E2, yang ditetapkan sebagai "kawasan hypervariable" (HVR) [4].

    Pada masa ini, 6 genotip utama dan lebih daripada 100 subtipe HCV telah dikenalpasti. Genotip 1a, 1b, 2a, 2b, 2c dan Za membentuk lebih daripada 90% isolat HCV yang terdapat di Amerika Utara dan Selatan, Eropah, Rusia, China, Jepun dan Australia / New Zealand [5]. Genotip 4, 5a dan 6 masing-masing direkodkan di Tengah dan Selatan Afrika, dan Asia Tenggara. Di Rusia dan negara-negara CIS, kekuasaan genotip 16 didaftarkan (tidak kurang daripada 68.9%) [6,7]. Adalah dipercayai bahawa pesakit yang dijangkiti genotip 1 (terutama 1b) merespon lebih teruk daripada rawatan daripada pesakit yang dijangkiti genotip lain virus.

    Dalam pesakit, HCV beredar sebagai populasi zarah virus di mana genom berbeza antara satu sama lain sebanyak 1-2% (dari kekhususan kuasi) akibat mutasi yang terkumpul semasa jangkitan dan / atau memasuki tubuh pesakit semasa jangkitan. Bentuk mutan ini boleh menyumbang kepada replikasi yang lebih aktif atau boleh membantu virus mengelakkan tindak balas imun badan dan berpotensi menjejaskan hasil jangkitan akut, perbezaan dalam perjalanan penyakit dan tindak balas terhadap terapi interferon [8].

    DEFINISI ANTI-HCV. Selepas penemuan virus HCV dan menentukan peranannya dalam pembangunan hepatitis pasca transfusi - "tidak A atau B", para penyelidik ditugaskan untuk membangunkan kaedah yang mampu mengesan orang dengan HCV dan sesuai untuk mendiagnosis hepatitis C. akut dan kronik Ditemukan bahawa antigen HCV beredar di kepekatan yang sangat rendah, dan jelas bahawa tahap metodologi pada akhir 80-an abad ke-20, yang digunakan untuk mengesan antigen virus, jelas tidak mencukupi.

    Pada tahun 1989, sekumpulan penyelidik dari Chiron Corporation, di bawah arahan Q-L.Choo, mengkloning RNA HCV dan mendapatkan oligopeptida imunoreaktif yang bertindak balas dengan antibodi yang beredar dalam darah pesakit dengan Hepatitis kronik "tidak A atau B". Oligopeptida ini menjadi asas ubat diagnostik untuk mengesan antibodi kepada HCV. Ini menentukan kemajuan pesat dalam pembangunan dan pengeluaran produk diagnostik komersial. Kaedah utama yang digunakan untuk mengesan anti-HCV, telah menjadi ujian imunosorben berkaitan enzim, sebagai satu kaedah yang memenuhi keperluan penjagaan kesihatan praktikal - iaitu. Ia mempunyai sensitiviti tinggi, kekhususan dan kemudahan pelaksanaan.

    Memandangkan HCV berterusan dalam darah pesakit dengan hepatitis C akut dan kronik serentak dengan anti-HCV, perhatian pemaju ubat-ubatan diagnostik memberi tumpuan kepada pembangunan sistem ujian untuk mengesan antibodi yang menyediakan pengesanan paling lengkap pembawa virus dan diagnosis awal jangkitan akut yang paling awal. Pelbagai antigen dan penentu antigen yang dikodkan oleh zon struktur dan bukan struktur RNA HCV telah menentukan arah dalam reka bentuk produk diagnostik dengan memilih dan mengatur oligopeptida yang digunakan untuk menciptanya. Sepanjang masa yang telah berlalu sejak penemuan HCV, sistem diagnostik tiga generasi telah dicipta (Jadual 1).

    Jadual 1
    Persediaan diagnostik untuk mengesan anti-HCV [9]

    Peptida yang digunakan
    zon RNA HCV di mana
    mereka dikodkan

    pengesanan pembawa%
    HCV

    Pertama kalinya
    mengenal pasti
    anti-HCV dari
    mula jaundis

    5-1-1 NS3
    C100-3 NS4

    C22-3 Teras
    C200 NS3 dan NS4
    SZZs NS3
    Dari 100-3 NS4

    C22-3 Teras
    C200 NS3 dan NS4
    SZZs NS3
    Peptide NS5

    Pengenalan peptida tambahan, terutamanya c22-3 (Teras), ke dalam persediaan diagnostik generasi ke-2 dan ke-3 yang dibenarkan untuk menyelesaikan masalah utama, iaitu untuk meningkatkan kepekaan, kekhususan dan, yang paling penting, pengesanan anti-HCV. Terima kasih kepada diagnostik generasi ke-3, sehingga 97% pembawa HCV dapat dikesan. Pada masa yang sama, perbincangan tertentu disebabkan oleh keputusan untuk memperkenalkan peptida diagnostik yang dikodkan oleh rantau H5V RNA HNV. Menurut beberapa penyelidik, kehadiran peptida ini tidak penting untuk meningkatkan kualiti ubat diagnostik. [10,11]. Walau bagaimanapun, antibodi kepada NS5 dapat dikesan lebih awal dalam jangkitan, yang meningkatkan kualiti diagnosis makmal hepatitis C. [12].

    Kini di seluruh dunia, termasuk Rusia, produk diagnostik generasi ketiga digunakan. Peptida yang digunakan dalam persediaan diagnostik diperoleh menggunakan teknologi rekombinan (contohnya, ujian diagnostik firma: Persediaan diagnostik, Nizhny Novgorod, Vektor, Novosibirsk, Roche, Abbott, dll), atau sintetik ( 000 MTS "Avicenna", St Petersburg; "Organon", dll.). Diagnostik, di mana kedua-dua jenis peptida digunakan secara serentak, telah ditetapkan sebagai ubat generasi ke-4. Menurut ciri-ciri mereka, ubat-ubatan ini tidak mempunyai perbezaan yang signifikan. Ujian perbandingan yang dilakukan secara kerap oleh Kementerian Kesihatan Rusia menunjukkan kepekaan yang serupa dengan produk diagnostik pengeluar domestik dan asing.

    Telah ditubuhkan bahawa penggunaan diagnostik generasi ke-3 untuk mengesan anti-HCV di kalangan penduduk immunokompeten (sebagai contoh, penderma darah) dianggarkan pada 98.8-100%. Pada masa yang sama, antara individu imunokompromi, seperti pesakit selepas pemindahan buah pinggang, sumsum tulang atau orang yang dijangkiti HIV, angka ini jauh lebih rendah - 50 - 95% [12]. S.George et al. [13] menunjukkan bahawa dalam 8.4% pesakit dengan jangkitan HIV, hasil negatif palsu pengesanan anti-HCV direkodkan. Selain itu, dalam pesakit sedemikian kesan seroreversi boleh didaftarkan semasa pemerhatian, iaitu. pendaftaran keputusan positif selepas tempoh anti-HCV seronegatif [14].

    Salah satu masalah yang paling penting ketika melakukan penelitian untuk kehadiran anti-HCV adalah hasil positif palsu. Penampilan mereka mungkin disebabkan oleh interaksi yang tidak spesifik terhadap komponen reaksi, kemungkinan tindak balas balas dengan antigen virus yang lain, dan banyak lagi faktor lain. Tahap hasil positif palsu dalam mengesan anti-HCV dengan pelbagai ubat diagnostik boleh mencapai 10-20% [15,16]. Tahap peningkatan hasil seperti itu diperhatikan di kalangan pesakit dengan penyakit onkologi dan autoimun, orang yang mempunyai keadaan imunodefisiensi dan pesakit dengan sifilis [16,17]. Kewujudan hasil positif palsu dihadapi oleh pekerja makmal dengan tugas membezakannya daripada pengesanan sebenar anti-HCV. Untuk menyelesaikan masalah ini ialah pengesanan RNA serum HCV dalam sampel darah. Walau bagaimanapun, hasil negatif pengesanan RNA HCV tidak mencadangkan kehadiran pengesanan palsu palsu anti-HCV. Perlu diingat bahawa anti-HCV dapat mengedarkan secara terpisah dalam darah pesakit yang telah pulih dari hepatitis C akut (10-15%) atau yang telah menghilangkan RNA HCV akibat terapi.

    UJIAN PEMERIKSAAN (TAMBAHAN). Ujian tambahan (Tambahan) telah dibentuk untuk membezakan antara sampel positif palsu dan sampel yang sebenarnya mengandungi antibodi kepada HCV. Selalunya dalam ujian ini prinsip immunoblot digunakan [sebagai contoh, ujian RIBA ("Diagnostik Ortho-Klinikal"); "LiaTek HCV" (Organon Teknika) apabila antigen yang dikodkan oleh zon berbeza RNA HCV terserap pada membran nitrocellulosa pada membran nitroselulosa. Anti-HCV berinteraksi dengan antigen terserap menggunakan antibodi berlabel enzim terhadap manusia Ig G dan pengesanan seterusnya menggunakan kompleks substrat. Selain imunoblot, persediaan diagnostik untuk mengesan anti-HCV terhadap antigen spesifik yang dikodkan oleh zon berbeza RNA HCV juga digunakan sebagai ujian tambahan ["Spektrum 4" (Imbio, Nizhny Novgorod; RecombiBest ANTI-HCV-SPECTR) - Vektor Terbaik ", Novosibirsk; ELISA- Anti-NSU-Spectr, NPO" Sistem Diagnostik ", Nizhny Novgorod].

    Pengembangan dan pelaksanaan ujian ini berjalan seiring dengan pengenalan ujian skrining untuk mengesan anti-HCV, mengulangi prinsip spektrum peptida yang diperluas yang digunakan dalam setiap produk diagnostik generasi berikutnya. Oleh itu, diagnosis RIBA-III berbeza dari generasi sebelumnya dengan penambahan peptida yang dikodkan oleh zon NS5. Prinsip untuk mengesahkan pengesanan positif terhadap anti-HCV, terutamanya termasuk: kemungkinan (dalam beberapa kes) untuk mendapatkan hasil yang lebih tepat daripada tindak balas enzimatik apabila berinteraksi dengan peptida individu, serta menggunakan spektrum peptida diperluas dalam diagnostik yang tidak digunakan dalam ujian skrining. Hanya pengenalan peptida baru boleh meningkatkan nilai diagnostik ujian pengesahan.

    Tafsiran hasil yang diperoleh, sebagai contoh, dalam ujian seperti RIBA-III, termasuk tiga jawapan yang mungkin: hasil positif, negatif, dan tidak menentu. Yang terakhir mereka dikeluarkan dalam kes ketiadaan petunjuk yang jelas (mengikut arahan yang dilampirkan pada kit diagnostik), membolehkan anda untuk menentukan hakikat kehadiran atau ketiadaan anti-HCV dalam sampel yang di bawah kajian. Nisbah spektrum tindak balas yang direkodkan semasa menjalankan ujian pengesahan bervariasi bergantung pada ciri-ciri kelompok pesakit yang anti-HCV dikesan terutamanya [18]. Menurut J.M. Pawlotsky et al. [19], separuh daripada keputusan dianggap sebagai "tidak ditentukan", adalah mungkin untuk mengesan HCV RNA. Pada pendapat kami, legitimasi tindak balas - "keputusan yang tidak menentu untuk mengesan anti-HCV," yang dikeluarkan oleh pekerja makmal kepada seorang doktor, terbukti bukan sahaja semasa menjalankan ujian pengesahan, tetapi juga secara rutin menguji kehadiran anti-HCV. Keperluan untuk menafsirkan keputusan tersebut adalah gambaran keadaan semasa diagnosis makmal hepatitis C.

    PENENTUAN ANTI-HCV IgM. Pada masa ini, kit diagnostik untuk mengesan IgM anti-HCV oleh syarikat telah dicipta dan sedang dihasilkan secara komersil: "Vector Best"; "Sistem Diagnostik"; Imbio, Abbott, dan lain-lain. Pada peringkat reka bentuk kit diagnostik, kit ELISA telah dibuat, berdasarkan peptida yang dikodkan oleh rantau HCV yang berbeza [20]. Pilihan dibuat pada peptida yang dikodkan oleh rantau Core RNA HCV dan pengesanan antibodi IgM kepadanya. Seperti penggunaan ujian untuk mengesan anti-HCV (IgG), keputusan positif palsu boleh direkodkan dalam ujian anti-HCV IgM. Menurut Stevensona D.L. et al. [21], sehingga 70% pesakit dengan hepatitis C kronik dengan kehadiran IgM anti-HCV serentak mempunyai tahap peningkatan faktor rheumatoid, yang menyumbang kepada penampilan hasil positif palsu. Walau bagaimanapun, menurut Pawlotsky J.M, kehadiran faktor rheumatoid tidak menjejaskan kualiti pengesanan IgM anti-HCV [22].

    PENENTUAN ANTIGENS HCV. Keupayaan untuk mengesan antigen HCV menarik perhatian penyelidik sejurus selepas penemuan virus tersebut. Kemungkinan utama pengujian mereka ditunjukkan oleh K. Krawczynski et al. [23], yang immunohistokimia mengesan antigen HCV dalam tisu hati, membuktikan kekhususan cahaya immunofluorescent. Penggunaan antibodi poli dan monoklonal terhadap pelbagai antigen HCV menunjukkan kehadiran Ag HCV teras, antigen yang dikodkan oleh zon NS3 dan NS4 HCV RNA dalam nukleus hepatosit dan sitoplasma dalam 60-90% pesakit dengan HS kronik) [24]. Antigen HCV dapat dikesan dalam kurang dari 5% sel hati.

    Sistem ujian diagnostik pertama ("Ortho Antibody to Core Antigen (Murine Monoclonal) Sistem Ujian EL1SA" dan "Imucheck F-HCV Ag Core Kokusai") untuk mengesan antigen HCV muncul di pasaran untuk persiapan imunobiologi pada tahun 1999. Sasaran untuk pengesanan adalah antigen teras HCV, yang ditentukan menggunakan fasa elisa ELISA fasa yang direka berdasarkan antibodi monoklonal. Kajian pertama mengenai penggunaan ujian ini menentukan kepekaan tinggi, kekhususan, dan prospek permohonan, terutamanya dalam perkhidmatan pemindahan darah [25,26]. Dipasang:

  • keupayaan untuk menentukan Core Ag HCV dalam serum atau plasma;
  • kekhususan pengesanan Core Ag HCV;
  • kehadiran orang dengan antigen yang beredar dalam seronegatif darah untuk anti-HCV;
  • kerap (90.3%) pengesanan Core Ag HCV dalam serum dengan kehadiran anti-HCV dan RNA HCV [25];
  • korelasi langsung antara kepekatan RNA HCV dan pengesanan Core Ag HCV [25];
  • penguncupan fasa "tetingkap" - dari saat jangkitan ke hasil positif pertama pengesanan anti-HCV. Telah ditentukan bahawa Core Ag HCV dapat dikesan dalam 83% kes (n = 24) keesokan harinya selepas pengesanan pertama RNA HCV [26] dan panjang (26 hari secara purata) sebelum penampilan anti-HCV [27].

    KAEDAH PENETAPAN RNA HCV. Tahap moden diagnosis makmal hepatitis C dapat dicirikan sebagai tahap awal penggunaan biologi molekul secara meluas untuk mengesan HCV RNA. Sebilangan besar kaedah pengesanan asid nukleik telah diuji untuk mengesan RNA HCV. Sebilangan besar kajian literatur yang diterbitkan dalam bahasa Rusia [28] dan penerbitan asing [29] ditumpukan kepada prinsip-prinsip merancang produk diagnostik dan penggunaannya untuk mengesan DNA atau RNA virus. Semua kaedah ini boleh dibahagikan kepada dua kumpulan, yang berdasarkan kepada penerapan prinsip-prinsip hibridisasi tanpa penguatan bahagian yang dipilih asid nukleik atau dengan penguatannya, yang dengan ketara dapat meningkatkan resolusi kaedah.

    Kaedah hibridisasi adalah berdasarkan gabungan probe hibridisasi berlabel (kejuruteraan genetik atau struktur molekul sintetik yang mengandungi urutan nukleotida yang melengkapi bahagian RNA yang dipilih). Analisis keputusan dijalankan mengikut intensiti isyarat yang datang dari label dalam komposisi kompleks yang terbentuk.

    Dalam hepatitis C, kaedah pengesanan HCV RNA ini terutama telah digunakan untuk mengenal pasti secara langsung dalam hepatosit, dan dalam ujian yang disebut sebagai in situ hibidization [30]. Kemungkinan pengesanan langsung RNA HCV dalam tisu memungkinkan untuk mengesannya dalam sel darah mononuklear, sel gland saliva dan tisu lain dari pesakit dengan hepatitis C [31,32].

    Kaedah hibridisasi yang digunakan untuk mengesan RNA HCV memungkinkan untuk menunjukkan kehadiran rantai negatif (replicative) RNA HCV, yang menunjukkan replikasi aktif virus [33].

    Kaedah reaksi rantai polimerase kini merupakan teknik teratur yang paling banyak digunakan yang mendasari hampir semua kaedah biologi molekul untuk mengesan RNA HCV. Selain itu, penentuan RNA HCV adalah mungkin dalam bentuk kualitatif dan kuantitatif, yang amat penting untuk pelantikan, pemantauan dan penilaian ke atas keberkesanan terapi yang digunakan.

    Varian utama kaedah ialah:

  • reaksi rantai polimerase (PCR);
  • tindak balas rantai ligase;
  • NASBA;
  • TMA (tindak balas penguatan pengulangan transkripsi, amplifikasi Transkripsi-pengantara).

    Reaksi rantai polimerase ialah kaedah pengesanan HCV RNA, baik di Rusia dan di luar negara. Ia didasarkan pada proses berbilang kitaran, menyerupai replikasi semulajadi asid nukleik, dengan setiap kitaran yang terdiri daripada peringkat berturut-turut.

    Dari bahan yang dikaji (serum atau plasma darah, biopsi hati), RNA HCV diasingkan. Memandangkan asid nukleik HCV diwakili oleh RNA, dan molekul cDNA diperlukan untuk penguatan, menggunakan transkripase enzim terbalik, pembentukan molekul cDNA HCV tunggal terkandas berlaku. Pada peringkat seterusnya, apa yang dipanggil "HCV" dilampirkan pada bahagian tertentu setiap rantai cDNA HCV Primer adalah oligonukleotida pendek yang saling melengkapi kepada urutan nukleotida yang diketahui. Perbandingan struktur utama rantau 5'UTR genom penebat HCV yang berbeza menunjukkan variabiliti tidak penting (antara genotip, homologi nukleotida - 92-98%, dan dalam genotip 98-99%). Ini menjadikan lebih baik memilih primata dari zon HCV RNA ini dan penggunaannya dalam sistem ujian diagnostik yang dihasilkan di negara kita dan di luar negara.

    Selanjutnya, dengan bantuan polimerase DNA yang bergantung kepada enzim DNA, sintesis segmen DNA baru berlaku. Pada masa ini, bakteria Thermophilus termus (Tth polymerase) atau Thermophilus aquaticus (Taq polimerase) yang paling biasa digunakan sebagai sumber enzim ini. Memiliki kestabilan terma di hadapan ion mangan dan magnesium, enzim ini boleh digunakan secara serentak untuk mensintesis molekul cDNA HCV tunggal terkandas dan menguatkan kawasan cDNA yang dipilih. Pada peringkat akhir satu kitaran tindak balas, menggunakan polimerase DNA, sintesis helai baru crona HCV pelengkap berlaku. Pengulangan pelbagai kitaran tindak balas membawa kepada pengumpulan serpihan cDNA HCV, yang boleh didaftarkan menggunakan elektroforesis gel polyacrylamide diikuti dengan pengesanan visual atau menggunakan hibridisasi dengan probe oligonukleotide, yang meningkatkan kepekaan dan kekhususan produk diagnostik yang digunakan. Penggunaan primer yang dilabelkan dengan enzim membolehkan rakaman hasil PCR menggunakan immunoassay enzim.

    Tujuan yang berterusan untuk penyelidik yang mereka bentuk sistem diagnostik untuk mengesan RNA HCV adalah untuk meningkatkan kepekaan dan kekhususan. Matlamat ini disampaikan oleh varian PCR, yang ditetapkan - "PCR bersarang" (bersarang PCR) [34]. Ciri khas kaedah ini dari "klasik" adalah penggunaan serentak dua pasang primer, salah satunya adalah pelengkap kepada bahagian dalaman amplicon yang diperolehi selepas pusingan pertama amplifikasi. Pada masa yang sama, dipercayai bahawa dengan varian PCR ini terdapat risiko yang lebih tinggi daripada pencemaran sampel, yang boleh mengakibatkan hasil positif palsu [35].

    Keperluan akut untuk penentuan RNA HCV dan kesulitan yang berkaitan dengan pengeluaran berskala besar kit diagnostik yang sangat sensitif dan khusus untuk diagnostik PCR telah menentukan penggunaan meluas persediaan yang dibuat di makmal saintifik. Perbandingan sistem ujian ini, yang dikenali sebagai "rumah" ujian ("dalam ujian rumah"), menunjukkan kepelbagaian yang tinggi dalam kepekaan dan kekhususannya, serta kekurangan reproduktif hasil antara makmal dan satu siri produk diagnostik. Oleh itu, apabila mengendalikan kitaran kualiti "luar" kitaran Eropah yang pertama untuk mengesan HCV RNA (1996) daripada 136 makmal, hanya 22 (16%) dapat menentukan dengan tepat atau tidak adanya RNA virus dalam sampel kawalan yang disediakan [36]. Hasil yang sama dicatatkan di negara kita, semasa kerja sama di bawah sistem kawalan kualiti luaran Persekutuan (2001), apabila daripada 14 makmal yang menyertai hanya 3 (21.4%) dapat menyelesaikan tugas dengan betul [37].

    Sebab-sebab penampilan keputusan palsu-negatif dan palsu-positif pengesanan RNA HCV adalah pelbagai. Untuk hasil negatif palsu:
    - kehilangan atau kemusnahan RNA HCV sebagai persediaan untuk tindak balas bahan klinikal;
    - kehadiran dalam sampel perencat yang mempengaruhi pelbagai komponen PCR. Inhibitor ini diwakili oleh pelbagai bahan kimia atau protein. Sebagai contoh: kehadiran dalam cecair sperma perencat transkripase terbalik tidak membenarkan mengesan RNA HCV dan bercakap tentang kemungkinan menyedari penghantaran seksual hepatitis C [38]; kehadiran hepaprine [39]; tahap cryoglobulin serum yang tinggi [40];
    - tidak mematuhi penyimpanan termal dan pengangkutan bahan klinikal. Untuk hasil positif palsu:
    - pencemaran antara sampel (apabila memproses sampel dan / atau bekerja dengan campuran reaksi), termasuk pencemaran dengan sampel kawalan positif;
    - pencemaran dengan produk pra-amplifikasi (amplicons) yang boleh mencemarkan sampel ujian dan penyelesaian melalui aerosol atau peralatan makmal.

    Pengenalan besar diagnostik PCR oleh definisi RNA HCV telah menetapkan tugas peralihan ke tahap baru penyelidikan makmal untuk pihak berkuasa penjagaan kesihatan. Pengasingan zon terisolasi untuk pelaksanaan tahap utama PCR (untuk penyediaan sampel; penguatan untuk mempertimbangkan hasil yang diperoleh); kit berasingan untuk setiap peringkat pakaian makmal reaksi, pipet automatik; kewujudan kit diagnostik standard dan, yang paling penting, kehadiran kakitangan makmal yang berkelayakan mengurangkan kejadian yang palsu.

    Kit standard yang pertama untuk menentukan RNA HCV ("AmplicorTM HCV", "Roche Diagnostic Systems") telah dikeluarkan pada tahun 1993. Selama bertahun-tahun, kit RNA HCV telah berkembang, tujuan utamanya adalah untuk meningkatkan kepekaan dan kekhususan mereka. Apabila mereka bentuk Amplicor TM HCV, beberapa kaedah asal digunakan untuk mengenal pasti 100 atau lebih salinan HCV RNA per ml, serta menangani kemungkinan kemungkinan pencemaran sampel dan penyelesaian yang digunakan dalam kit. Penggunaan enzim - amperses dan deixiuridine triphosphate (dUTP) memungkinkan untuk memusnahkan kitaran pertama penguatkaan aplicons sebelumnya dengan pencemaran yang mungkin berlaku. Kemusnahan penguatan pada akhir kitaran penguat pertama (pada + 55 ° C) tidak membenarkan enzim untuk memusnahkan larutan terpilih sebagai sasaran. Inovasi utama ialah pengenalan kawalan dalaman. Makna inovasi ini terletak pada pengenalan jujukan yang serupa dengan RNA HCV yang diperkuatkan ke dalam setiap sampel ujian, yang kemudiannya dikesan menggunakan primer yang bersamaan dalam reaksi amplifikasi dalam mod yang sama. Ketiadaan reaksi positif dalam mengesan kawalan dalaman menunjukkan kehadiran hasil negatif palsu terhadap reaksi terhadap kehadiran RNA HCV dalam sampel yang di bawah kajian. Generasi berikutnya didiagnosis dengan ubat, yang ditetapkan sebagai "HCV Amplicor 2.0", yang apabila digunakan, mempunyai had sensitiviti 50 molekul RNA HCV.

    Sistem untuk mengesan HCV RNA menggunakan kit Roche tidak boleh dipertimbangkan secara berasingan daripada peralatan mereka, yang menentukan kualiti ujian yang tinggi. Pemaju kaedah ini berusaha untuk mengautomasikan semua peringkat tindak balas. Perwujudan idea ini adalah sistem "COBASAmpliPrepTM", yang membolehkan anda mengautomasikan sepenuhnya proses mengasingkan RNA, amplifikasi dan pengesanan HCV, dengan itu mengurangkan risiko hasil positif palsu dan palsu, sambil mengekalkan sensitiviti dan kekhususan yang tinggi [41].

    Reaksi rantai ligase untuk pengesanan RNA HHC (LCR). Kaedah ini berdasarkan keupayaan enzim "ligase DNA yang bergantung kepada DNA" untuk menjahit (ligate) rehat ikatan fosfodiester dalam DNA dengan kehadiran ion ATP dan Mg 2+. Seperti "PCR" klasik untuk mengesan RNA HCV, peringkat pertama LCR adalah transkripsi terbalik untuk menghasilkan cDNA HCV. Selanjutnya, DNA ligase mengikat dua pasang primer (pelengkap kepada 5 'zon tanpa kod RNA HCV), yang diperkuatkan lagi. Pengesanan produk penguatan LCR dilakukan dengan mengambil kira tindak balas antigen-antibodi. Setiap satu daripada dua primer dilabelkan dengan hapten yang berbeza. Yang pertama adalah ditangkap oleh antibodi yang terserap pada mikropartikel. Selepas prosedur mencuci menggunakan pasangan antibodi kedua yang dilabel dengan label fluorescent, mereka secara selektif berinteraksi dengan hapten dalam produk penguatan, diikuti oleh reaksi substrat dan mengira fluorimeter.

    Kepekaan kaedah ini adalah kira-kira 200 salinan RNA HCV per ml, yang membolehkan penggunaannya untuk menyelesaikan pelbagai masalah diagnostik klinikal [42]. Pada masa ini, kit diagnostik untuk mengesan HCV RNA berdasarkan LCR dihasilkan oleh Abbott.

    Asid nukleik Pengukuhan Seaquence - Kaedah NASBA untuk pengesanan HCV RNA adalah berdasarkan tindakan serentak tiga enzim: transkripase myeloblastoma burung, RNAase burung dan polimerase RNA T7 [43]. Tidak seperti RT PCR, langkah pertama tidak membalikkan transkripsi RNA HCV. Menggunakan enzim yang digunakan, lebih daripada 10 (9) salinan kawasan cDNA HCV boleh didapati dalam masa 90 minit [44]. Kemungkinan untuk melaksanakan tindak balas pada suhu rendah (+41 C) sangat memudahkan kerja dan menghapuskan keperluan peralatan yang menyediakan perubahan kitaran dalam suhu tinggi. Rekod hasil tindak balas dilakukan menggunakan electrochemiluminescence. Walaupun NASBA adalah dekat dengan RT PCR dalam kepekaannya, kaedah ini tidak digunakan secara meluas untuk mengesan RNA HCV. Pada masa ini, varian kaedah sedang dibangunkan yang menggabungkan prinsip-prinsip NASBA dan "Real-time RT PCR".

    Kaedah penguatan transkripsi-pengantara (TMA) berbeza dari PCR dan LCR terutamanya kerana ia terus menguatkan serpihan RNA HCV, dan bukan cDNA HCV. Pada peringkat awal tindak balas, primer (No. 1) dilampirkan pada RNA HCV dan satu salinan molekul sasaran, cDNA, disintesis dengan menggunakan enzim (transkripasi terbalik). Transkripase terbalik, yang juga mempunyai aktiviti RNase-H, memusnahkan RNA virus dalam RNA-cDNA hibrid. Seterusnya, primer kedua dilampirkan pada molekul cDNA, diikuti oleh penyempurnaan DNA double-stranded menggunakan transkripase terbalik. Dengan bantuan polimerase β-RNA yang lain, RNA ditranskripsikan dari cDNA, yang membawa kepada pembentukan 100 hingga 1000 naskhah amplicon RNA HCV dalam satu kitaran reaksi. Primer No. 2 dilampirkan pada aplikasi RNA ini dengan sintesis selanjutnya salinan cDNA dan pemusnahan molekul RNA. Melampirkan primer No. 1 ke cDNA diikuti dengan penyempurnaan DNA double-stranded mencetuskan kitaran penguatan seterusnya. Merekodkan hasil tindak balas dilakukan pada lumenometer, kerana amplicon RNA yang dihasilkan secara khusus berinteraksi dengan probe DNA yang dilabelkan dengan chemilumines.

    Sebagai kelebihan kaedah TMA dalam mengesan RNA HCV, ia diperhatikan:

  • menjalankan tindak balas pada suhu yang lebih rendah berbanding dengan PCR;
  • pembentukan lebih banyak amplicons dalam satu kitaran tindak balas, yang mengurangkan masa yang diperlukan untuk mendapatkan hasil akhir (30-40 minit) dan meningkatkan kepekaan tindak balas (50 salinan / ml) [45].
  • mengurangkan risiko pencemaran, kerana RNA kurang stabil daripada DNA.

    Kajian komparatif mengenai pengesanan RNA HCV menggunakan TMA dan kaedah lain telah membuktikan kebetulan keputusan yang tinggi [45].

    Gabungan prinsip-prinsip hibridisasi dan amplifikasi mendasari kaedah mengesan RNA HCV, yang ditetapkan sebagai "Kaedah hibridisasi menggunakan proba bercabang atau ujian DNA Branded (bDNA) [46]. Tidak seperti PCR, ujian ini menguatkan bukan molekul cDNA HCV, tetapi isyarat. Reaksi dilakukan di 96 plat lempung di mana serpihan RNA HCV dari 5 'zalim yang tidak diterjemahkan dan gen teras RNA HCV terserap, disebabkan oleh pengikatan selanjutnya pada molekul DNA bercabang sintetik dan hibridisasi dengan sampel yang dilabelkan dengan phosphotase alkali dengan peningkatan yang mendadak dalam isyarat yang diterima dicapai dengan penguat dan tindak balas enzimatik. Pada masa ini, diagnostik generasi ketiga telah muncul di pasaran diagnostik (Vaueg 3.0 Hepati-tis C Virus RNA), yang mempunyai sensitiviti untuk mengesan 520 IU / ml (2500 salinan HCV RNA).

    DETEKSI QUANTITATIF RNA HCV. Untuk menilai kepekatan HCV RNA yang digunakan versi kuantitatif PCR. Pada mulanya, kepekatan HCV RNA dicirikan oleh nilai-nilai ordinal, seperti "+", "++", dan lain-lain, secara visual mencerminkan intensiti band yang diperolehi oleh elektroforesis produk amplifikasi, atau melalui kaedah pencairan akhir, iaitu dengan adanya keputusan positif pada akhir titik titrasi. Kesulitan penyeragaman semua peringkat PCR tidak membenarkan penilaian objektif kepekatan RNA HCV, yang membawa kepada kesilapan besar dalam tafsiran hasil yang diperolehi.

    Pada masa ini, hasil kajian dinyatakan dalam unit kuantitatif: bilangan salinan RNA HCV yang terkandung dalam 1 ml., Dalam istilah mutlak atau logaritika (log 10). Berdasarkan fakta bahawa kepekatan RNA HCV yang dikesan mencerminkan bilangan zarah virus, penunjuk ini dirujuk sebagai "bersamaan viral (eq)", dengan penambahan awalan k (kilogram, seribu) atau M (juta). Satu lagi cara untuk menyatakan jumlah zarah virus ialah berat badan mereka yang setara. Sebagai contoh, dalam gram atau picograms (1 pg sepadan dengan kira-kira 1 juta ek). Pelbagai nilai yang digunakan menjadikannya sukar untuk mentafsirkan hasil yang diperolehi dalam pelbagai makmal. Oleh itu, Jawatankuasa Pakar WHO mengenai Standardisasi Biologi telah menghasilkan "contoh standard antarabangsa" yang mengandungi RNA HCV (membekukan serum kering yang mengandungi RNA HCV genotip 1), kepekatan yang dinyatakan dalam unit antarabangsa (IU / mL) [47]. Koefisien khas membolehkan anda mengira semula penunjuk kepekatan yang diperolehi dalam unit antarabangsa.

    Hampir semua varian PCR digunakan untuk menentukan kepekatan RNA HCV. Dalam kes ini, beberapa keperluan khusus dikenakan ke atas persediaan diagnostik, yang paling penting adalah garis lurus yang ketara hasilnya, iaitu peningkatan dalam isyarat tindak balas yang direkodkan dengan peningkatan kepekatan RNA HCV dalam sampel di bawah kajian. Penggunaan piawaian dalaman dengan tahap RNA HCV yang berbeza membolehkan kami untuk mengelakkan banyak kesalahan metodologi yang mungkin menjejaskan hasil akhir tindak balas [28]. Kepekaan diagnostik yang digunakan (Amplicor HCV Monitor v2.0; LCx HCV RNA Quantitative Assay) memungkinkan untuk mengesan RNA HCV bermula pada 50 naskah per ml [48.49], yang amat penting untuk meramalkan keberkesanan terapi antiviral yang dipilih.

    PCR masa nyata (RT "RT masa nyata") adalah salah satu pilihan yang paling menjanjikan untuk kaedah kuantitatif untuk mengesan RNA HCV. Kaedah dan perkakasannya dikembangkan secara bersama oleh pakar dari Roche dan Percin Elmer. Prinsip kaedah ini adalah keupayaan untuk menghidrolisis urutan cDNA ke arah 5 '---- 3'. Reaksi ini menggunakan probe khas yang dilabelkan dengan dua pewarna fluoresen yang mempunyai penyerapan yang sama dan maksimum fluoresen. Dengan kehadiran produk penguatan, polimerase Tag membersihkan siasatan, yang menghalang pemindahan tenaga dari satu molekul pewarna ke yang lain, dan dengan itu menghalang pembebasan kuantum cahaya. Satu instrumen khas mencatatkan reaksi dan pemodelan matematik kinetik pendarfluor pada setiap peringkat tindak balas, yang membolehkan mendapatkan maklumat mengenai kepekatan awal RNA HCV.

    Ciri khas "PCR masa nyata" adalah keupayaan untuk mendapatkan maklumat mengenai kehadiran RNA HCV secara langsung dalam proses tindak balas, yang membolehkan untuk mengurangkan masa analisis dalam kombinasi dengan kepekaan tinggi dan lineariti hasil [50]. Menurut Tatyana Yashina dan penulis bersama, kaedah ini dapat mengesan 200 salinan RNA HCV per ml. [51].

    KAEDAH GENOTYPING RNA HCV. Takrif HCV yang dipunyai oleh genotip dan subtipe tertentu telah digunakan untuk menyelesaikan bukan sahaja semata-mata saintifik, tetapi juga isu-isu praktikal. Sebagai contoh: mencari sumber jangkitan semasa wabak hepatitis C atau meramalkan keberkesanan terapi yang digunakan.

    "Standard emas" genotyping HCV adalah penentuan langsung struktur utama RNA HCV dengan analisis phylogenetic seterusnya [52], yang memungkinkan untuk jelas menggambarkan virus ini mengasingkan. Maklumat ini boleh didapati dengan menggunakan pilihan penjujukan berikut:

  • langsung;
  • berdasarkan kloning standard;
  • penjujukan produk reaksi PCR (sekatan terhad).
    Walaupun ketepatan keputusannya, kaedah penjujukan langsung tidak digunakan dalam penjagaan kesihatan praktikal kerana kesukaran teknikal kajian dan kos kerja yang tinggi. Pada masa yang sama, ketersediaan maklumat mengenai struktur utama RNA HCV adalah kaedah rujukan untuk genotyping, dan ketersediaan instrumen untuk urutan seragam memudahkan mendapatkan keputusan.

    Pada masa ini, dalam kebanyakan kes, kaedah berdasarkan penggunaan PCR dengan primer jenis khusus digunakan untuk genotip RNA HCV. Buat pertama kali, genotype RNA HCV dilakukan oleh N. Okamoto dan penulis bersama pada tahun 1992 menggunakan RT-PCR [53], yang termasuk dua langkah penguatan. Yang pertama dilakukan dengan universal, untuk semua genotype HCV, primer, yang kedua dengan campuran primers khusus jenis dengan mendapatkan produk penguatan spesifik dari pelbagai panjang. Kehadiran genotip tertentu dihakimi oleh saiz produk yang diperkuatkan. Sebagai primer, probe jenis khusus digunakan, maklumat tentang yang terletak di kawasan 5'UTR, Teras atau NS5 - RNVGS [54].

    Hibridisasi produk yang diperkuatkan dengan probe khusus gen terserap (dari zon HCV RNA yang tidak diterjemahkan) yang diangkat pada membran nitrocellulose yang mendasari ujian "INNO-LiPA HCV, INNO-GENETICS" [55]. Pada mulanya, menggunakan ujian ini, adalah mungkin untuk mengetik genotip: la; lb; 2a; 2b; 3a; 3b; 4 dan 5a. Pada masa akan datang, sistem ujian generasi ke-2 "INNO-LiPA HCV II, INNOGENETICS" membolehkan kita membezakan semua 6 genotip dan tambahan 2c; 2d; 2i; 3c; 4a-h; 6a dan 10a. [56]

    Arsenal metodologi untuk menentukan genotip HCV tidak terhad kepada kaedah di atas dan termasuk pelbagai kaedah:

  • genotip berdasarkan analisis profil sekatan produk yang diperkuatkan (RFLP). Produk-produk amplifikasi serpihan RNA HCV (5'UTR - rantau RR HCV atau rantau NS5) dipecahkan oleh enzim sekatan. Serpihan yang dihasilkan berbeza panjang bergantung pada tapak sekatan di dalamnya, yang dipotong. Keputusan elektroforesis dan perbandingan mereka membolehkan kita mengenal pasti genotip HCV dalam sampel yang di bawah kajian [57]. Perbandingan hasil genotip oleh PCR-RFLP dengan penjujukan data menunjukkan kebetulan keputusan yang tinggi - 95% [58].
  • genotip berdasarkan kaedah SSCP (penilaian polimorfisme konformasi serpihan DNA terkandas). Kawasan 5'-diterjemahkan RNA HCV, yang mempunyai set minimum variasi nukleotida yang membezakan genotip antara satu sama lain, dipilih sebagai objek kajian. Fakta ini menentukan kemungkinan menggunakan primer biasa semasa genotyping [59].

    SEROTYPING Anti-HCV dimungkinkan oleh kajian oleh P.Simmonds dan pengarang bersama yang menubuhkan kehadiran antibodi yang diarahkan kepada epitope khusus genotip, maklumat tentang mana yang dikodkan oleh rantau HCV RNK [60]. Dengan bantuan diagnostik untuk ELISA, dibina berdasarkan peptida sintetik, adalah mungkin untuk membezakan antara kes-kes hepatitis C yang disebabkan oleh virus 1, 2 dan 3 genotype (89% perlawanan dengan hasil genotip). Perkembangan sistem ujian menggunakan antigen sintetik dan rekombinan yang dikodkan oleh NS4 dan Zon Teras RNA HCV membolehkan kami memperluaskan senarai jenis varian virus, serta menilai kehadiran subtipe (1a, lb, 2a, 2b, 3a, 4a) [61,62]. Pada masa ini, pengeluaran produk diagnostik komersial untuk serotyping dijalankan dalam versi spot ELISA - "Murekh NA 1-6 Serotyping Assay, Murex Diagnostics", dan dalam varian "immunoblot" - RIBA HCV Serotyping Assay, Chiron Diagnostics. Data perbandingan hasil serotyping dan genotyping RNA HCV menunjukkan tahap kebetulan yang tinggi, mencapai 95% [62].

    Serotyping anti-HCV berbanding dengan genotyping RNA HCV mempunyai kelebihan seperti kemudahan reaksi dan kos yang lebih rendah. Pada masa yang sama, kaedah ini tidak boleh menggantikan genotyping. Hasil serotyping anti-HCV menunjukkan jenis anti-HCV dengan jangkitan semasa atau sebelumnya. Dalam sesetengah kes (kebanyakannya pada pesakit dengan hemofilia), pengesanan serentak anti-HCV dari subtipe yang berbeza telah direkodkan, yang mungkin menunjukkan pelbagai jangkitan dengan subtipe yang berbeza dan genotip HCV [63]. Di samping itu, pada pesakit dengan hepatitis C terhadap latar belakang keadaan immunodeficiency yang jelas, RNA mungkin satu-satunya penanda, yang menjadikannya mustahil untuk melakukan serotyping.

    PENGENALAN DAN RAWATAN KEPUTUSAN UJIAN PENYAKIT PENCARIAN SERCOGIK HCV. Kehadiran pelbagai penanda serologi jangkitan HCV semasa atau sebelum ini, serta asas metodologi moden, membolehkan menyelesaikan masalah diagnosis makmal dan pencegahan hepatitis C. Jadual 2 menunjukkan penanda serologi jangkitan HCV dan bidang yang paling penting dalam ujian mereka.

    Jadual 2
    Kepentingan diagnostik penanda jangkitan semasa atau sebelumnya HCV

    Pemeriksaan
    dalam perkhidmatan
    darah

    Pengesahan
    menunggu
    hasilnya
    + anti-HCV

    Salah satu tugas utama diagnosis makmal hepatitis C adalah untuk mendiagnosis dan membezakan akut dari hepatitis C kronik dengan mengenal pasti penanda serologi jangkitan. Seperti dengan hepatitis virus akut yang lain, penanda serologi bagi jangkitan HCV secara konsisten muncul dan hilang semasa jangkitan dan proses penyembuhan (Rajah 2).

    RNA HCV boleh dikesan pada hari 7-21 selepas jangkitan dengan HCV, dan anti-HCV pada hari 20-150 (purata 50 hari) [64]. Spektrum anti-HCV mungkin berbeza-beza bergantung kepada tempoh hepatitis akut. Adalah dipercayai bahawa yang pertama dapat mengenal pasti antibodi yang dikodkan oleh zon Teras dan NS5 RNA HCV. Anti-HCV kepada protein yang dikodkan oleh zon NS4 tidak hadir dalam fasa akut hepatitis C [65]. Kajian komparatif mengenai tahap kepekatan anti-HCV, spektrum anti-HCV dan RNA HCV pada pesakit dengan hepatitis akut dan kronik menunjukkan beberapa perbezaan [66]. Pada pendapat kami, perbezaan ini mungkin dikaitkan dengan ciri-ciri individu proses berjangkit, yang mengurangkan nilai diagnostik mereka.

    Rajah. 2. Hepatitis C akut

    Dengan analogi dengan diagnosis makmal hepatitis A dan B, diharapkan penentuan antibodi kepada IgM kelas HCV akan mempunyai nilai diagnostik sebanyak IgM anti-HAV dan IgM anti-HBc. Walau bagaimanapun, data ujian dari serum pesakit dengan hepatitis C akut dan kronik untuk kehadiran IgM anti-HCV menunjukkan bahawa mereka sering dijumpai di kalangan pesakit ini - 50-93% dan 50-70%, masing-masing [67.68]; hasil ini menunjukkan bahawa pengesanan IgM anti - HCV tidak boleh digunakan sebagai penanda jangkitan HCV akut.

    Ketiadaan penanda yang menuntut peranan "emas" piawai hepatitis C akut menentukan keperluan penilaian komprehensif mengenai hasil yang diperoleh, berdasarkan pemerhatian dinamik pesakit.

    Tidak kurang pentingnya penggunaan kaedah yang sangat sensitif untuk menguji RNA HCV - mengurangkan risiko mengembangkan hepatitis C. Pasca-transfusi keperluan untuk kerja tersebut ditentukan oleh kehadiran fasa "tetingkap", iaitu. masa antara pengesanan pertama RNA HCV dan penampilan anti-HCV, serta kewujudan penderma darah (pesakit dengan hepatitis C kronik) yang mempunyai HCV RNA tanpa ketiadaan HCV. Sistem semasa untuk memonitor darah yang disumbangkan untuk HCV hanya termasuk ujian anti-HCV, dan risiko jangkitan dengan hepatitis C tetap. Berdasarkan hal ini, persoalan menguji darah untuk kehadiran RNA HCV dengan menggunakan metode modern (metode NAT - "uji penguatan asid nukleik") adalah sah. Faktor yang membatasi kerja ini adalah kos penyelidikan yang tinggi. Untuk mengurangkan kos, disyorkan untuk menguji kolam sera darah (dari 8 hingga 96 sampel) diikuti dengan mencari sampel positif dalam kes pengesanan RNA HCV di kolam sera. Mengambil kira faktor pencairan RNA HCV yang dikehendaki apabila membiak sera darah, persoalan menggunakan kaedah pengesanan yang paling sensitif menjadi penting. Adalah dipercayai bahawa penggunaan kit diagnostik untuk NAT - dengan kepekaan 50-100 IU / mL dapat mengurangkan risiko hepatitis C. Selepas pemindahan

    Tidak syak lagi, senarai isu-isu yang boleh diselesaikan semasa menguji keseluruhan spektrum penanda jangkitan HCV tidak terhad kepada dua bidang ini. Ketersediaan kaedah ujian moden dalam kombinasi dengan pengetahuan keupayaan mereka membuka prospek yang luas untuk kerja saintifik dan diterapkan pada hepatitis C.

  • Top